实验：可乐中山梨酸与糖精钠的HPLC测定
发布时间：2016-10-24 浏览次数：0次
一、实验目的
1.了解山梨酸、糖精钠作为食品添加剂的利弊及危害。
2.掌握HPLC在食品添加剂定量分析中的一般方法和操作过程。
二、实验原理
山梨酸是一种化学防腐剂，可以防止食品腐败变质，延长食品保存期，抑制食品中微生物的繁殖；糖精钠是一种人工合成甜味剂，其甜度为蔗糖的500倍，且价格低廉，常作为视频中的矫味剂。
糖精自1879年应用以来一直广泛使用并认为安全性高。但本世纪70年代初发现其对鼠有致癌性问题后，美国即从其GRAS名单中删除，并宣布禁用而后又延期禁用。1977年JECFA将其以前制订的无条件ADI（每日允许摄入量acceptable daily intake）0-5mg/kg体重改为暂定ADI 0-2.5mg/kg体重，并取消有条件ADI 0-15mg/kg体重。1984年JECFA再评价时，认为本品无诱变作用，仍需继续对其毒理问题进行研究并维持其暂定ADI。直到1993年再次对其进行评价时，认为以人类无生理危险，并制定ADI为0-5mg/kg体重。
山梨酸的ADI 为0-25mg/kg体重，是一种相对安全的食品防腐剂；在我国可用于酱油、醋、面酱类、果酱类、酱菜类、罐头类和一些酒类等食品。
添加剂在食品加工过程中被广泛使用，正确地使用食品添加剂对提高食品质量、防止食品变质有一定的积极作用, 但是食品添加剂不是食品原有成分，如果使用过量，就有可能对人体造成危害。GB2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》对其在饮料中最高使用量作了规定（如表1所示）因此要加强食品添加剂的管理, 获得准确、可靠的实验分析数据显得尤为重要。
表1
食品添加剂 食品名称/分类 最大使用量（mg/kg） 备 注
山梨酸及其钾盐 饮料类（包装饮用水类除外） 500 以山梨酸计
糖精钠 饮料类（包装饮用水类除外） 150 以糖精计
可乐是黑褐色、甜味、含咖啡因的碳酸饮料。由于碳酸化学性质不稳定，易在室温下发生分解并释放CO2。为防止实验过程样品中大量碳酸盐的存在而影响实验结果，样品首先超声除去二氧化碳，并用稀氨水调节pH至中性，稀释并过滤后，进样至高效液相色谱仪中，经反相液相色谱分离后，根据保留时间与峰面积进行定性与定量。
三、仪器与试剂
1.仪器：高效液相色谱仪、色谱工作站、超声波清洗器等。
试药：甲醇（色谱纯）、乙酸铵（0.02mol/L）、氨水（2%）等为分析纯。
对照品：糖精钠标准品、山梨酸标准品。
可乐样品（密度：ρ0=1.0394kg/L）。
色谱条件：C18（250mm×4.6mm，5.0μm）色谱柱；
柱温为室温；
测定波长230nm；
流速：1.0mL/min；
流动相：甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液（9:91）；
进样量：20μL。
四、实验步骤
（一）样品溶液的配制
将可乐倒入三角瓶中超声除气15min，用稀氨水调节试液pH
至7左右。移液管精密量取试液5mL至容量瓶中，定容至25mL，用0.45μm水系滤膜过滤，即得样品溶液。
（二）对照品溶液的配制
精密称定糖精钠对照品与山梨酸对照品各10mg分别至10mL量瓶中，加水溶解、稀释至刻度，摇匀，得糖精钠1.00mg/mL、山梨酸1.00mg/mL的储备液。精密量取储备液各1mL至10mL容量瓶，加水稀释至刻度，得糖精钠山梨酸100μg/mL混合工作液。
精密量取1μL糖精钠及山梨酸混合工作液至10mL容量瓶，稀释至刻度，用0.45μm水系滤膜过滤，得混合对照品溶液。
（三）分析过程
分别取混合对照品溶液与样品溶液20μL注入色谱仪，记录样品中的目的峰面积，根据外标法计算样品中山梨酸与糖精钠的含量。
Cx=（Ax/AR）×CR
式中 Cx为供试品溶液添加剂X的浓度
Ax为供试品溶液中添加剂X的峰面积
CR为对照品溶液中添加剂X的浓度
AR为对照品溶液中添加剂X的峰面积
Cx0=Cx×5/ρ0
式中 Cx0为可乐中食品添加剂X的浓度（mg/kg）
ρ0为可乐的密度
将Cx0与表1饮料中最高使用量进行对比，得出结论。
五、注意事项
1.本实验的进样量为20μL，但定量主要依靠六通进样阀的定量管，因此为保证充满定量管，进样量不应太少，本次实验应取不少于25μL。
六、思考题
1.利用反相液相色谱法进行定量实验的优势？
2.食品样品测定时，用乙酸铵作为流动相的原因？